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免疫印跡法中蛋白樣品制備

來源：上海喆圖科學儀器有限公司 2019年07月09日 17:22

　　1.單層貼壁細胞總蛋白的提取

　　(1)倒掉培養液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走)。

　　(2)每瓶細胞加3 ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH7.2～7.3)。在恒溫搖床平放輕輕搖動1 min洗滌細胞，然后棄去洗液。重復以上操作兩次，共洗細胞三次以洗去培養液。將PBS棄凈后把培養瓶置于冰上。

　　(3)按1ml裂解液加10 μl PMSF(100 mM)，搖勻置于冰上。(PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。)

　　(4)每瓶細胞加400 μl含PMSF的裂解液，于冰上裂解30 min，為使細胞充分裂解培養瓶要經常來回搖動。

　　(5)裂解完后，用干凈的刮棒將細胞刮于培養瓶的一側(動作要快)，然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5 ml離心管中。(整個操作盡量在冰上進行。)

　　(6)于4℃下12000 rpm離心5 min。(提前開離心機預冷)

　　(7)將離心后的上清分裝轉移倒0.5 ml的離心管中放于-20℃保存。

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