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PanaceaGel3D細胞培養(yǎng)常見問題
點擊次數(shù)：624 發(fā)布時間：2021-2-23
1 問：PanaceaGel是什么？
答：PanaceaGel是化學合成的肽水凝膠，PH為中性。該凝膠為透明、生物可降解、3D網(wǎng)絡支架，不包含任何生物來源的成分，小瓶盛裝。
2 問：PanaceaGel是什么材質(zhì)的？
答：PanaceaGel100%是由13個天然氨基酸化學合成的肽。原子力顯微鏡（AFM）和電鏡(SEM,TEM)觀察也發(fā)現(xiàn)，水溶液中小肽根據(jù)天然3D網(wǎng)狀結構自發(fā)組裝成納米纖維。由合成肽和碳酸鈉調(diào)節(jié)水凝膠PH值，約8.5%的海藻糖作為等滲試劑調(diào)節(jié)滲透壓。
3 問：PanaceaGel剛性如何？
答：隨著肽濃度和混合物中鹽濃度變化，PanaceaGel剛性不斷變化。培養(yǎng)細胞分泌的細胞外基質(zhì)也會影響其機械強度。例如流變學測量顯示，以2:1的比例混合PanaceaGel（0.4%）和DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)，儲能模量（G’）和損耗模量（G’’）分別為97.0 ± 2.1 Pa 和 15.3 ± 1.4 Pa。
4 問：PanaceaGel需要滅菌么？
答：發(fā)貨前PanaceaGel已經(jīng)經(jīng)過高壓滅菌。無需進一步滅菌。
5 問：如何儲存PanaceaGel？
答：PanaceaGel需在4-25℃避光保存。
6 問：室溫條件下PanaceaGel穩(wěn)定性如何？
答：未開封的PanaceaGel在4-25℃時保存在黑暗處能放置6個月。長期穩(wěn)定性研究正在進行中。
7 問：PanaceaGel應用于細胞懸液時需進行任何預處理么？
答：不需要。PanaceaGel的PH為中性，所以用于細胞懸液時無需再平衡。二者極易混合，但液體混合時一定要迅速，因為PanaceaGel只要暴露于培養(yǎng)基中的鹽中流動性就會大大降低。
8 問：PanaceaGel能用于何種細胞？
答：已經(jīng)使用PanaceaGel成功培養(yǎng)了以下細胞：
小鼠骨骼肌細胞(C2C12)
大鼠骨骼肌細胞(L6)
小鼠成纖維細胞(NIH3T3)
人成纖維細胞(TIG-1)
人軟骨肉瘤細胞(OUMS-27)
新生的心肌細胞（直接分離得到）
9 問：PanaceaGel和其他細胞三維培養(yǎng)材料有何異同？
答：參考下表
PanaceaGel | 膠原Collagen | 生物可降解聚合物 Biodegradable polymer | |
來源 | 合成 | 動物源性 | 合成 |
剛性 | 中等 | 中等 | 硬 |
PH | 中性 | 中性、酸性 | 中性 |
生物親和性 | 良好 | 良好 | |
透明度 | 高 | 高 | 低 |
10 問：實驗中如何選擇PanaceaGel使用濃度？
答：有兩種濃度的PanaceaGel，分別為0.4%和0.8%。初始實驗，推薦將0.4%的PanaceaGel和細胞懸液以1:1的比例等體積混合，獲取PanaceaGel終濃度為0.2%。0.8%的PanaceaGel能用于制作更高硬度的水凝膠。根據(jù)細胞類型不同，PanaceaGel和細胞的密度也不同。
11 問：在PanaceaGel中如何培養(yǎng)細胞？
答：參考試驗步驟。
12 問：使用PanaceaGel時需要特殊裝置么？
答：不需要
13 問：生長條件和限制是什么？
答：細胞終濃度為5×105～1×106cells/mL，對大多數(shù)類型細胞都可以選擇普通培養(yǎng)基。PanaceaGel 3D培養(yǎng)細胞厚度不超過2mm。
14 問: PanaceaGel用過的細胞能再次培養(yǎng)么？
答：可以。破壞支架后通過移液能釋放細胞并再次培養(yǎng)。
15 問：如何將生物活性物質(zhì)整合到PanaceaGel中（小肽，生長因子等）？
答：生物活性物質(zhì)能添加到培養(yǎng)基或細胞懸液中。如果加入培養(yǎng)基中，生物活性物質(zhì)必須在30分鐘內(nèi)浸潤并抵達細胞。若添加到細胞懸液中，需保持生物活性物質(zhì)適濃度。
16 問：能否在PanaceaGel表面培養(yǎng)細胞？
答：可以。添加細胞懸液前，PanaceaGel能包被培養(yǎng)皿、插件、孔板或其他細胞培養(yǎng)盤。加入細胞懸液時操作要輕柔，避免攪動。
17 問：PanaceaGel 3-D培養(yǎng)的細胞下游分析有哪些？
答：我們已成功進行過以下實驗：
-用DAPI 或PI或鈣黃綠素染細胞測免疫活性
-熒光試劑染色后進行DNA 計數(shù)
-Western blot分析
-免疫染色
-SEM
-TEM
18 問：PanaceaGel3D 培養(yǎng)的細胞能移植到體內(nèi)進行分析么？
答：滿載細胞的PanaceaGel能植入活體動物組織中，進行專門活體研究。PanaceaGel本身是生物可降解的，體外研究中表明無毒性。