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免疫磁珠細胞分選過程中常見問題及注意事項
點擊次數：4693 發布時間：2021-2-23
細胞分選是細胞生物學、分子生物學重要的技術方法及必要前提，根據細胞的類型及后續試驗目的，目前技術比較成熟且應用較廣泛的主要有：密度梯度離心法、免疫密度離心法、免疫磁珠法和流式技術等。隨著科技的不斷進步，相信各種方法越來越完善，同時一些新的方法也在研究之中，如微芯片CHIP技術。
其中，免疫磁珠技術因具有特異性好、靈敏度高、分選速度快、使用方便、成本低、應用廣等特點，自應用推廣以來受到廣泛而大量的應用，目前已經成為主要的細胞分選方法。常見問題及注意事項如下。
免疫磁珠技術的原理：
1、基于抗體對抗原的特異性識別；
2、磁性微珠直接或者間接偶聯在抗體上，從而與細胞相連進行標記（如下圖）；
3、在高強度、梯度磁場中標記的細胞被磁性吸附，未標記細胞首先流出，然后洗脫被吸附的細胞（陽性分選）達到細胞磁性分離的目的。
免疫磁珠細胞分選過程中常見問題：
1、都能分選哪些細胞？
答：理論上可以分選所有的細胞，但需要根據所分選細胞的特性開發出相應抗體的磁珠。實際上，目前市場上已經進行能夠購買到幾乎所有常用的細胞分選磁珠。
2、需要哪些設備和試劑耗材？
答：需要的設備有：分選器（提供磁場）、分選架（為分選器提供支撐的支架）；所需耗材有：分選柱（細胞分離及洗脫的容器）和磁珠。根據分選方式、分選量以及操作方式可選多種類型分選器（Mini免疫磁珠*、Midi免疫磁珠*、Mini&Midi免疫磁珠*、 Super 免疫磁性*、 Vario 免疫磁性*以及autoMACSTM Pro全自動免疫磁珠分選儀等），其中手動方法的的是Mini&MidiMACS分選器，autoMACSTM Pro全自動免疫磁珠分選儀則大量應用于醫院等大量分選細胞的單位。
3、分選柱是否可重復使用？
答：分選柱屬耗材，不可重復使用，可處理后重復使用2-5次。處理方法：將長試管注滿PBS，回抽柱子的活塞，倒出回抽液。倒入新的PBS，打出之；重復兩次---此時基本上將柱子內的雜細胞除盡。再抽、打兩三次*或95%酒精，然后置于50-60度烘箱，過夜，即能防止生銹。
4、一支分選柱能分選多少細胞？
答：根據柱子種類不同，具體能分選的細胞數目同，基本數量應在107～1010間。詳細信息參考說明書材料。
5、一瓶磁珠能使用多久？或能分選多少細胞？
答：一瓶2ml裝大約可以分選109個細胞。
6、分選的細胞純度是多少？
答：良好的實驗條件及正確的操作下，一般的純度都在90%以上。
7、一次分選所需時間？
答：手動操作在30分鐘內可完成分選，自動分選2.5-10分鐘即可。
8、分選后的細胞可以進行哪些應用？
答：分選后，不活化細胞，不改變細胞功能，分選細胞活性好，則可用于進一步的細胞培養或細胞與分子水平的分析。
免疫磁珠細胞分選過程中注意事項：
1、待分選細胞中如有貼壁細胞，建議在分選前先貼壁培養去除，或者提高EDTA濃度。
2、抗體包被磁珠對死細胞常有非特異性結合。因而分選前去除死細胞。
3、新鮮分離骨髓細胞，先用膠原酶、DNA酶、*聯合消化，可使細胞團塊解聚，從而提高分離效率。
4、上分離柱前，充分振蕩，混懸細胞，打散細胞團塊。
5、用分離柱分選，應用真空抽濾水，減少水中氣泡，使分離柱不被氣泡阻滯。
6、細胞懸液加入分離柱中時，應將滴管伸至底壁后加入，避免將細懸液沿管壁流入，使管壁殘流末分選細胞，以致后繼洗柱過程中，因疏忽末被洗下，后導致純度不高。洗柱時，應在前次液體充分流盡后，再加洗液。
7、分選細胞量應根據說明書控制，不超量。
8、孵育時間和溫度應按說明書進行，延長孵育時間、提高溫度會增加非特異結合。
9、先用抗體阻斷Fc受體，可降低非特異性結合。