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病理切片、石蠟切片制作過程中注意事項
點擊次數：3688 發布時間：2021-2-23
病理切片是診斷患者疾病的主要手段之一。病理切片制作過程復雜漫長，影響病理切片制作質量的因素眾多，常見問題歸納如下：
一、固定標本要充分及時：固定標本是制片的個環節；固定時間不合適或者固定不正確的組織，在染色時常會出現較淺的核質著色和輪廓不清，還會出現不同程度的片狀發白區；固定液的濃度要適宜，固定標本的正確方法為：組織離體后快速放入適宜濃度的固定液中，固定液的量大約為標本體積的7倍左右，盛放標本的容器以不使標準變形為宜，大小適中。
二、規范對標本進行取材：取材的原則為：保持病變的特征和器官的完整性。盡量修除無關組織，切面盡量做到平整，原則上小標本要全部制片，大標本宜在病變部位以及病變部位與正常組織交界處多處取材。
三、及時更換試劑：在整個切片過程中，試劑的使用比較頻繁，試劑的濃度改變，會影響到組織的脫水、透明、浸蠟效果，有些試劑因為揮發到別的試劑中，甚至會導致對病理組織的污染，從而產生誤診。因此，制片過程應注意觀察試劑情況，根據標本量的大小及時更換試劑，確保組織處理達到要求。
四、組織包埋、切片：小塊組織要采用線狀包埋，大塊組織要在包埋時整理平整，以防出現切片不*或片內組織雜亂而造成診斷醫師誤診[3]。切片機應隨時檢查刀口是否鈍化，隨時保持刀口鋒利以防出現切片斷裂、破碎的情況。切片力求完整，盡量將每塊組織切到大面，以防發生漏診。
五、 染色、封固要仔細，掌握好烤片條件：一般為60℃烤片0.5～1 h，過高溫度和過長時間都會導致組織發黑，染色不清；脫蠟過程也相當重要，如果出現脫蠟不干凈，那么就會出現切片不易著色和著色不勻的情況。鹽酸乙醇的分化是影響染色效果的關鍵環節。分化不足和過度都會導致染色失敗。樹膠的稠度也應適中，樹膠過稀過多會發生溢膠，樹膠過稠過少又會出現封片不全或空泡。完成切片固封后，應及時貼好標簽，防止出現混淆事故。
六、加強操作人員的工作責任心，減少因人為因素導致差錯事故及壞片的發生。
病理組織石蠟切片注意事項：
一、組織固定取材
臨床所取標本要新鮮，否則細胞內溶酶體會破裂，造成細胞自溶。組織固定液多選用10% 中性福爾馬林，其有效成分為甲醛，甲醛易揮發，使得福爾馬林的效用會越來越低，所以福爾馬林現配現用; 固定液體積要超過標本的10～ 20 倍，否則固定不充分，影響染色; 固定標本的容器要以使標本不變形為宜；取材時，除嚴格按照病理標本取材操作規范外，小標本一般全取，大標本在去除不必要的組織后，要特別注意病變部位與正常組織交界處；取材切片觀察面要平整，否則組織經脫水后變韌，導致組織包埋時不能壓平于包埋盒中，切片時修整蠟塊很繁瑣。
二、脫水包埋
現組織多采用程序化脫水浸蠟，所以要根據標本的多少及大小及時更換脫水機內試劑，否則會影響脫水效果，使組織與蠟不能相溶，無法制作出合格的組織蠟塊。條件允許的情況下可根據組織標本的不同選擇合適的石蠟，組織韌性大選擇高熔點石蠟，組織軟選取低熔點石蠟。包埋時，組織要充分壓平于包埋模底部，以保證組織的預期觀察切面在同一水平; 先向包埋盒中灌滴少許液體石蠟，此步驟可使成型蠟塊底部光滑平整，再將組織觀察面壓平于包埋盒底部，組織擺放緊湊但不重疊。為使包埋組織的蠟塊快速凝固，一般先將浸液體蠟的包埋盒置于冷凍臺上，蠟塊在置于冷凍臺上后，應在蠟大部分或*凝固后，再移動包埋盒; 若蠟塊未*凝固，而移動了包埋盒，成型蠟塊底部平整度相差甚遠，有的凝固蠟塊底部平整，有的蠟塊底部不平整，可致小標本在修片的過程中被浪費。
三、切片
切片時常見問題及常用解決方法如下:
(1) 切片橫向褶皺過多，不能成帶。原因: 蠟塊溫度過高; 切片刀變鈍; 切片刀邊緣粘有少量石蠟。解決方法: 將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上，使蠟塊降溫; 更換切片刀的位置，或換新的切片刀; 或用水沾濕紗布，順切片刀刀口方向，輕輕擦拭切片刀。
(2) 切片上有位置固定的一道或幾道裂縫或裂紋。原因: 切片刀有小缺口; 蠟塊內有雜質或體積較小的似骨( 鈣) 化性較硬的組織; 包埋時蠟塊不均勻凝固。解決方法: 移動切片刀或更換新的切片刀; 用少量鹽酸軟化硬的鈣化性組織; 重新包埋蠟塊。
(3) 切片上有位置不定的數道小裂縫或裂紋。原因: 蠟塊溫度過高; 切片刀變鈍。解決方法: 將蠟塊重新放置冰袋或冷凍盒上，使蠟塊降溫; 更換切片刀的位置，或更換新的切片刀。
(4) 切出的蠟條明顯向一側彎曲變形。原因: 彎曲處蠟塊質地不均，蠟塊未修整好，邊緣毛糙等; 彎曲處切片刀變鈍。解決方法: 重新修整蠟塊; 移動切片刀; 冷凍蠟塊，蠟塊質地稍變硬后也可以使彎曲變小。
(5) 切片厚薄不均，或是每固定幾片后，切出一張完整的片子。原因: 蠟塊過硬或過大; 蠟塊夾持器或切片刀松動; 切片機微動失靈，不能調節出正確的切片厚度。解決方法: 組織塊過硬可重新取材包埋，過大可重新包埋; 調整機器，上緊刀片; 修理機器。
四、漂片注意事項
漂片溫度選擇比蠟塊熔點低10 ℃即可。溫度過高會使蠟條產生數目不等的小氣泡。
五、烤片注意事項
烤片時溫度與時間的選擇范圍廣，可從37 ℃烤箱烤干1 天至75 ℃烤箱烤干20 min，可以根據不同目的需要，確定烤片時間和溫度，或是依石蠟熔點來確定，一般將溫度控制比石蠟熔點高10 ～ 15 ℃。
六、 染色注意事項
(1) 組織脫蠟透明等過程采用物質分子相似相溶原理，試劑有效成分容易減少，所以脫蠟試劑要及時更換，若脫蠟不充分，會使切片染色不均勻; 因乙醇、二甲苯等易揮發，故在操作完成時，應及時封蓋，溶液濃度降低會影響洗片效果;
(2) 染色時，鹽酸乙醇分化步驟尤其重要，分化的目的是使胞核染色，而無背景色。明礬蘇木精性質使其在酸性溶液中呈現紅色，在堿性溶液中呈現藍色。在鹽酸乙醇分化時，切片由深藍變為粉紅色時，應停止分化。分化時，有經驗者可以肉眼觀察切片至粉紅色時終止分化，初學者可鏡下多次觀察切片，至切片除胞核外，無其他背景著色時，停止分化;或是依據鹽酸乙醇濃度，確定分化時間，試劑初配制時，鹽酸乙醇濃度高，分化時間短，反之則分化時間延長。切片分化完成后，將切片移至弱堿性的溶液中返藍，一般采用自來水，或是溫度在50 ℃的自來水中，因其本身為弱堿性，且取用方便，所以被廣泛使用。
七、封片注意事項
(1) 需吹干或烤干切片上水分，否則鏡下觀察時有一層白霧，導致細胞輪廓不清楚;
(2) 病理組織切片HE 染色一般采用中性樹膠封片，封片時以無氣泡為準，否則會影響鏡下
觀察; 常用24 mm × 32 mm 大小的蓋玻片，只需用一次性的巴氏吸管滴二滴中性樹膠即可，過少則致封片不*，過多則致中性樹膠外溢。